傳染性胰臟壞死病病毒RT-PCR試劑盒

傳染性胰臟壞死病病毒RT-PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

產(chǎn)品型號：50次
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時間：2020-08-05
訪問量：420

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詳細介紹

品牌	其他品牌	貨號	XY-0422
規(guī)格	50T	供貨周期	一周
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁

傳染性胰臟壞死病病毒RT-PCR試劑盒

Infectious Pancreatic Necrosis Virus(IPNV)

產(chǎn)品及特點

傳染性脾腎壞死病病毒(Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus， ISKNV）會引起傳染性脾腎壞死病，是以脾、腎壞死為主要病理特征的一種病毒性疾病。病魚嘴張大，呼吸加快，食欲下降，魚體變黑，有時有抽筋樣顫動；頭部充血，口四周和眼出血；脾臟腫大、糜爛和充血，呈紫黑色；腎臟腫大、充血和潰爛；肝臟腫大，有缺血狀、土黃色或有淤血點等癥狀；常見有腹水，腸內(nèi)有時充滿黃色粘稠物，膽囊腫大；鰓貧血，發(fā)白，伴有寄生蟲或細菌感染出現(xiàn)出血、腐爛等現(xiàn)象。傳染性脾腎壞死病主要流行于我國南方淡水養(yǎng)殖的鱖中，具有很高的死亡率，對鱖養(yǎng)殖業(yè)造成很大的威脅，嚴重危害我國鱖養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展，因此傳染性脾腎壞死病病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發(fā)了簡單快捷的傳染性脾腎壞死病病毒染料法熒光定量 PCR 檢測試劑盒，它具有下列特點：

1. 一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù)傳染性脾腎壞死病病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

傳染性胰臟壞死病病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成份	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	傳染性脾腎壞死病病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	傳染性脾腎壞死病病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	天凈沙核酸釋放劑（試用裝）	20 次（1mL，綠蓋）
試劑七	使用手冊	1 份）

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照；用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	樣品	陽性對照	陰性對照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
傳染性脾腎壞死病病毒 RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2 個制備的 RNA 樣品	各12.5 μL
超純水		12.5 μL
傳染性脾腎壞死病病毒 RT-PCR 陽性對照的 100 倍稀釋液	L		12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過程	溫度	時間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	30 min
預變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35 個循環(huán)）	98℃	10 sec
PCR 反應(yīng) （35 個循環(huán)）	65℃	35 sec
延伸	72℃	1min

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產(chǎn)物或陽性對照無擴增產(chǎn)物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產(chǎn)物、陽性對照有 122bp 預期的擴增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果，如果有擴增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。

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