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2015-06-23 產(chǎn)品展示/ Product display
人乳頭瘤病毒18染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類(lèi)皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類(lèi)和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。
產(chǎn)品型號(hào)：50次廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家更新時(shí)間：2020-08-03訪 問(wèn) 量：486
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| 品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | XY-0404 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 一周 |
| 主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁 |
人乳頭瘤病毒18染料法熒光定量PCR試劑盒
Human Papillomavirus 18(HPV-18)
產(chǎn)品及特點(diǎn)
人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）是一種屬于乳多空病毒科的乳 頭瘤空泡病毒 A 屬，是球形 DNA 病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。表現(xiàn)為 尋常疣、生殖器疣（尖銳濕疣）等癥狀。 隨著性病中尖銳濕疣的發(fā)病率急速上升和宮 頸癌、肛門(mén)癌等的增多，人乳頭瘤病毒感染越來(lái)越引起人們的關(guān)注。其中黏膜高危型 HPV-16、18、30、31、33、35、39 與宮頸癌、直腸癌、口腔癌、扁桃體癌等相關(guān)， 其早期檢測(cè)非常重要。本產(chǎn)品就是針對(duì)此需求而建立的一種定量檢測(cè) HPV-18 型病毒 的高靈敏的 PCR 檢測(cè)方法。本試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1. 根據(jù) HPV-18 保守區(qū)設(shè)計(jì)的針對(duì) HPV-18 的 PCR 引物，專一性強(qiáng)。
2. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
3. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
4. 本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
5. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
人乳頭瘤病毒18染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×qPCR MagicMix | 1.0 mL（棕色，裝 A 袋） |
試劑二 | 超純水 | 1 mL（紅蓋，裝 A 袋） |
試劑三 | 引物 14-30418F | 1 OD（本色，裝 B 袋） |
試劑四 | 引物 14-30418R | 1 OD（本色，裝 B 袋） |
| 試劑五 | HPV-18 陽(yáng)性對(duì)照 (10E8copy/μL) | 50 μL（白蓋，裝 C 袋） |
| 試劑六 | DNA 病毒裂解液（試用裝） | 15 次（9 mL） |
試劑七 | 使用手冊(cè) | 1 份 |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存(A 袋和 B 袋的試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū)、C 袋的陽(yáng)性對(duì)照分開(kāi)放置)， 有效期一年。
自備試劑 DNA 模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見(jiàn)使用方法）。
使用方法 一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。
二、引物的制備（在樣品制備室進(jìn)行）
2. 按引物標(biāo)簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見(jiàn)引物試管上 的標(biāo)簽），使得兩條引物的濃度均為 10 μM（10 pmol/μL），然后各取 50 μL 混合在一起，標(biāo)注為引物混合物，放冰上待用。
三、稀釋陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高， 因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成 分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照， 只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 126bp 的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。
3. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
4. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
5. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用超純水 10 倍梯度稀釋到 10E8 拷貝/μL。放冰上 待用。
6. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分 鐘，得 10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分 震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
8. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5 拷貝/ μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
9. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，得 10E4 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放 冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
三、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 在 PCR 管中加入下列成分（待測(cè)樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次。樣品管 和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子 儲(chǔ)存好后后加）：
成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管（2-7 管） |
2×qPCR Mix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
引物混合物 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自備 10×ROX (見(jiàn)注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
待測(cè)樣品 DNA 模板 | 1-5 μL |
|
|
| 陽(yáng)性對(duì)照（2-7 號(hào)） | 各 5μL（2 號(hào)樣到 2 號(hào)管，3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…） | ||
補(bǔ)水到 | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行 優(yōu)化）。
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 預(yù)熱 | 95℃ | 1 分鐘 |
預(yù)變性 | 95℃ | 15 秒 |
PCR 反應(yīng) （40 個(gè)循環(huán)） | 55℃ | 15 秒 |
| 60℃ | 15 秒 | |
72℃ | 15 秒 |
12. 數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí)， 大吸收光譜在 471 nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的大吸收光譜在 500 nm，大發(fā)射光 譜在 530 nm。
13. 根據(jù)所用熒光定量 PCR 儀器的方法進(jìn)行溶解曲線分析（每種儀器可能稍微有所不 同），排除非特異擴(kuò)增。
四、數(shù)據(jù)處理
14. 以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品 濃度的 log 和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
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