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2015-05-14 2015-08-05 2014-11-14 2015-01-16 2014-12-03 產(chǎn)品展示/ Product display
組織胞漿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。
產(chǎn)品型號：50次廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家更新時間：2020-08-03訪 問 量：512
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| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | XY-0376 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 一周 |
| 主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 | 應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁 |
組織胞漿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒
Histoplasm spp.
產(chǎn)品及特點
組織胞漿菌(Histoplasm spp)會引起組織胞漿菌病，是一種在世界范圍內(nèi)廣 泛流行的傳染病，尤其是以嬰幼兒和老年人多見，男性發(fā)病率高于女性，臨床表 現(xiàn)有原發(fā)性肺部感染、播散性感染等，原發(fā)性肺部感染常表現(xiàn)為發(fā)熱、頭疼、全 身不適和干咳，嚴重者會出現(xiàn)低氧血癥和呼吸衰竭，播散性感染常有發(fā)熱、體重 下降、全身不適、肝脾腫大等癥狀，罕有伴發(fā)肺病變等癥狀，該細菌的感染對人 體健康造成嚴重損害，因此快速檢測組織胞漿菌通用具有重要意義。熒光定量 PCR 是檢測傳染性疾病的主流技術(shù)，本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術(shù)為 基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測組織胞漿菌通用的試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 特異性高，引物是根據(jù)組織胞漿菌通用高度保守區(qū)設(shè)計,不擴增其他微生物。
3. 引物和擴增體系經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性比常規(guī) PCR 高 100 倍。
4. 提供無傳染性的 PCR 陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
5. 一管式操作，熒光 PCR 檢測，不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 PCR。
組織胞漿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×qPCR MagicMix | 0.5 mL（棕色） |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL（黃蓋） |
試劑三 | 組織胞漿菌通用 PCR 引物 | 100 μL（白蓋） |
試劑四 | 組織胞漿菌通用 PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL（黃蓋））
|
| 試劑五 | 天凈沙核酸釋放劑試用裝 | 20 次（1mL，綠蓋） |
試劑六 | 使用手冊 | 1 份 |
運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、制備標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。 由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原， 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，用帶芯槍頭， 下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（其濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提 供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備 陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。。
三、設(shè)置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做樣品），6 個用于標準曲線樣 品。如果做定性檢測，則不需要設(shè)計標準曲線，只取 1×10E5 拷貝/μL 的 陽性對照做 PCR 陽性對照。
10. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好 后后加）：
成分 | 樣品管 N+2 個 | PCR陰性對照 | 標準曲線 樣品管（2-7 管） |
2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各10 μL |
組織胞漿菌通用 PCR 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
| 自備 10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
待測樣品 DNA 模板 | 6 μL |
| - |
| 自備超純水 | 6 μL | ||
第 7 步所得標準曲線樣 品稀釋液（2-7 號） | - |
| 各 6μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…） 管…） |
11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同 而自行優(yōu)化）。
四、熒光定量 PCR 反應參數(shù)
過程 | 溫度 | 時間 |
預變性 | 95℃ | 3 min |
PCR 反應 （40 個循環(huán)） | 95℃ | 20 s |
60℃ | 30s（采集 SYBR 通 |
五、數(shù)據(jù)處理
12. 設(shè)定 60℃-96℃范圍的融解曲線分析，排除假陽性。
13. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
14. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該 小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小 于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽性。
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