貓杯狀病毒前病毒PCR試劑盒

Feline Calicivirus(FCV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

貓杯狀病毒（Feline calicivirus, FCV）是一種無衣殼的 RNA 病毒，主要 在淋巴結(jié)內(nèi)繁殖復(fù)制。主要通過飛沫傳播，所謂的飛沫傳播指得就是打噴嚏， 噴口水的傳播方式。貓杯狀病毒感染是貓病毒性呼吸道傳染病，主要表現(xiàn)為上 呼吸道癥狀，即精神沉郁、漿液性和粘液性鼻漏、結(jié)膜炎、口腔炎、氣管炎、 支氣管炎，伴有雙相熱。貓杯狀病毒感染是貓的多發(fā)病，發(fā)病率高，死亡率低。 因此檢測貓杯狀病毒具有重要意義。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)： 

1. 即開即用，用戶只需要提供 FCV 的 cDNA 模板（需要提前做逆轉(zhuǎn)錄）或 含有 FCV 前病毒 DNA 的樣品。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增貓杯狀病毒前病毒，與其他病毒沒 有交叉反應(yīng)

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。 

貓杯狀病毒前病毒PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果是提取的 FCV 的 RNA，則先逆轉(zhuǎn)錄得到 cDNA。本試劑盒不提供相 關(guān)試劑。

2. 如果是要提取前病毒 DNA，則用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試 劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。

3. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和 一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在 200μL 水中加 10μL 貓 杯狀病毒前病毒 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對 照是直接用 200μL 水。提取結(jié)束后后得到 200μL 模板 DNA（每個樣品） 放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則 PCR 抑制物很 可能會抑制 PCR。 二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

4. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

5. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

6. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。