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2016-05-27 2015-06-05 2015-03-04 2017-08-15 2015-05-08 
貝爾格萊德病毒型染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據其理化性質分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚、粘膜和神經組織。
產品型號：50次廠商性質：生產廠家更新時間：2020-07-30訪 問 量：533
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| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | XY-0244 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 一周 |
| 主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁 |
貝爾格萊德病毒型染料法熒光定量PCR試劑盒
Dobrava-Belgrade Virus
產品及特點
貝爾格萊德病毒型（Dobrava-Belgrade Virus）是一種致命性病毒，可以透過體 液，包括血液、排泄物、唾液及嘔吐物傳播。對于這種具高度傳染能力，而同時致命的 疾病，目前沒有任何疫苗或醫(yī)治的方法。病患者病狀為發(fā)高燒，腹瀉、嘔吐，身體各孔 穴嚴重出血。通常病發(fā)后一周死亡。病發(fā)死亡率為百分之二十五至百分之一百，因此快 速檢測貝爾格萊德病毒型具有重要意義，為此本公司開發(fā)了簡單快捷的貝爾格萊德病毒 型染料法熒光定量 PCR 檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據貝爾格萊德病毒型保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
貝爾格萊德病毒型染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 500μL（棕色管） |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL（黃蓋） |
試劑三 | 貝爾格萊德病毒型PCR 引物混合液 | 100 μL（白蓋） |
試劑四 | 貝爾格萊德病毒型PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) | 50μL（紅蓋） |
| 試劑五 | DNA 病毒裂解液（試用裝） | 15 次（9 mL） |
試劑六 | 使用手冊 | 1 份 |
運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。
自備試劑 DNA 模板、10×ROX（根據機型決定，具體見使用方法）。
使用方法 一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬 不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原， 本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對 照
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)， 充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分 震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備
8. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）， 一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 上步制備的 PCR 陽性對照的第 4 號（濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當于 1 萬拷貝）或第 5 號（濃度為 1×10E5 拷貝/μL，10μL 相當于 10 萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求 的體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為 NC。如果每次制備需要 200μL 樣品， 則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。
9. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。
10. 如果只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個 樣品，1 個用于 PCR 陰性對照，6 個用于 PCR 陽性對照。如果做 2-3 次重復，則 反應設置數量相應增加 2 或 3 倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢 后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：
成分 | 樣品管 N+2 個 | PCR 陰性 對照管 | PCR 陽性 對照管（2-7 管） |
2×qPCR MagicMix （棕色管） | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
貝爾格萊德病毒型 PCR 引物混合液（白蓋） | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自備 10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2 待測樣品 cDNA 模板 | 6 μL |
|
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第 7 步所得 PCR 陽性對照 稀釋液（2-7 號） |
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| 各 6μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…） |
12. 蓋上蓋子后上機，按下面參數進行 PCR（具體 PCR 參數可以根據儀器不同而自行 優(yōu)化）。
過程 | 溫度 | 時間 |
預變性 | 92℃ | 5 分鐘 |
PCR 反應 （30 個循環(huán)） | 92℃ | 60 秒 |
| 56℃ | 60 秒 | |
72℃ | 60 秒 |
13. 數據采集 具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產品中所含的熒光染料在不結合 DNA 時， 大吸收光譜在 471 nm，結合 DNA 時的大吸收光譜在 500 nm，大發(fā)射光 譜在 530 nm。信號采集可以設置在復性或延伸步驟。
四、數據處理
14. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱 軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
15. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等 于 40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為 陽性。如果在 35-40 之間，則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則 為陰性，如果小于 40，則為陽性。
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