牛腎盂腎炎棒桿菌PCR試劑盒

Corynebacterium renale

產(chǎn)品及特點(diǎn)

腎棒狀桿菌(Corynebacterium renale)革蘭氏染色陽(yáng)性，為球桿狀或棍棒 狀，呈單在、成叢或柵欄樣排列。細(xì)菌性腎盂腎炎由腎棒狀桿菌引起，主要發(fā) 生于母牛，公牛少見，馬和綿羊偶可發(fā)生。本病為尿源性感染，因此病原菌經(jīng) 尿道生殖道口感染后，先引起尿道炎、膀胱炎，然后再逆行導(dǎo)致 腎盂腎炎。由于腎組織損傷與尿液滯留，終病畜可因尿毒癥而死亡。病牛主 要表現(xiàn)發(fā)熱，食欲不振，尿頻，尿少，尿因混有黏液、膿液、大量蛋白質(zhì)、膿 細(xì)胞和白細(xì)胞、脫落的上皮細(xì)胞等而渾濁帶血色。尿液涂片或細(xì)菌培養(yǎng)可發(fā)現(xiàn) 病原菌。嚴(yán)重病例常發(fā)生尿毒癥。因此牛腎盂腎炎棒桿菌檢測(cè)具有重要的意義。 本試劑盒根據(jù) PCR 原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增牛腎盂腎炎棒桿菌。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

牛腎盂腎炎棒桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一 個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性 對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。