梭狀芽孢桿菌屬通用PCR試劑盒

Clostridium spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

梭狀芽孢桿菌（Clostridium spp.）屬于孢子菌，在自然界中是一種非常 *的種類。本菌屬細(xì)菌在自然界分布廣泛，常存在于土壤、人和動(dòng)物腸道以 及物中。多為腐物寄生菌，少數(shù)為致病菌，能分泌外毒素和侵襲性酶類， 引起人和動(dòng)物患病。因此快速靈敏檢測梭狀芽孢桿菌具有重要的意義，本試劑 盒就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)： 

1. 即開即用，用戶只需要提供細(xì)菌 DNA 模板。 

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增梭狀芽苞桿菌 DNA，跟其他微生物 無交叉反應(yīng)。能檢測出的梭狀芽苞桿菌包括丁酸梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、新 生兒梭菌、生胞梭菌、艱難梭菌、雙酶梭菌、乙二酸梭菌、索氏梭菌等。 

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

梭狀芽孢桿菌屬通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對照和一 個(gè)樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對照和一個(gè) PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。