百日咳波氏桿菌PCR試劑盒

百日咳波氏桿菌PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據(jù)其理化性質分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

產(chǎn)品型號：50次
廠商性質：生產(chǎn)廠家
更新時間：2020-07-24
訪問量：509

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詳細介紹

品牌	其他品牌	貨號	XY-0128
規(guī)格	50T	供貨周期	一周
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。	應用領域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁

百日咳波氏桿菌PCR試劑盒

Bordetella pertussis

產(chǎn)品及特點

百日咳是一種由百日咳波氏桿菌引起的急性呼吸道傳染病。百日咳波氏桿菌是革蘭陰性桿菌，可產(chǎn)生一些致病物質，包括百日咳毒素、氣管細胞毒素、腺苷酸環(huán)化酶毒素、不耐熱毒素以及內(nèi)毒素等。百日咳毒素可使患者淋巴組織中的淋巴細胞動員到周圍血液及氣管，細胞毒素可特異性損傷氣管纖毛上皮細胞，使之變性、壞死。百日咳的臨床特征為咳嗽逐漸加重，呈典型的陣發(fā)性、痙攣性咳嗽，咳嗽終末出現(xiàn)深長的雞啼樣吸氣性吼聲，病程長達 2-3 個月，故有百日咳之稱。本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)檢測百日咳波氏桿菌的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增百日咳波氏桿菌，與其他病原沒有交叉反應。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

百日咳波氏桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	百日咳波氏桿菌 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	百日咳波氏桿菌 PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	使用手冊	1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設置 PCR 反應（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照，故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

成分	樣品管 N+2 個	PCR 陰性對照管	PCR 陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μLL
百日咳波氏桿菌PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個樣品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 陰性對照（水）		18 μL
PCR 陽性對照（百日咳波氏桿菌 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液）			18 μL

4. 按下表設置 PCR 反應：

過程	溫度	時間
預變性	95℃	5 min
PCR反應（35個循環(huán)）	95℃	15 secc
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
后延伸	72℃	10 min

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。

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